中藥化學(xué)成分及其復(fù)雜, 若要從復(fù)雜的混合物中提取對(duì)人體有效的單一中藥活性成分,使用傳統(tǒng)的方法很難達(dá)到高純度。但靈活綜合地應(yīng)用各種層析技術(shù)，如正相層析，離子交換。分子篩，反相層析，逆流色譜，為中草藥的提取提供了一個(gè)有效的技術(shù)平臺(tái)。層析技術(shù)具有重復(fù)性好，可在線檢測(cè)，純度高，易于產(chǎn)業(yè)化，易于自動(dòng)化，是科學(xué)研究和工藝開拓的**方法。
關(guān)鍵詞：Sephadex LH-20 Sepharose Q， Sepharose SP， Spurce15 RPC
一．應(yīng)用于中草藥純化的凝膠簡(jiǎn)介
（一）Sephadex LH-20
*內(nèi)外有很多利用Sephadex LH-20 純化天然產(chǎn)物的文獻(xiàn)報(bào)道。可純化的天然產(chǎn)物有甙、生物堿、黃酮、內(nèi)酯、多酚，有機(jī)酸及甾類等化合物。雖然Sephadex LH-20通常被認(rèn)為是凝膠過濾的膠，由于它是Sephadex G-25交聯(lián)羥丙基而成。它除了具有凝膠過濾作用以外，它還同時(shí)具有吸附層析和分配層析的性質(zhì)。吸附層析依賴于被分離化合物與凝膠之間的氫鍵的數(shù)量和質(zhì)量；分配層析依賴于被分離化合物在流動(dòng)相（溶劑）和固定相（凝膠）之間的分配，這主要由樣品的極性和溶劑的極性決定的。可利用的有機(jī)溶劑通常有丙酮，乙酸已酯，氯仿，三氯甲烷，和四氫呋喃等。
（二）離子交換Sepharose FF/HP Q,SP,DEAE, CM
Sepharose Fast Flow Q,SP,DEAE, CM離子交換介質(zhì)是以瓊脂糖為架的離子交換介質(zhì)，具有高流速加上高載量，同時(shí)具有高化學(xué)穩(wěn)定性。
（三）反相層析Source RPC
Source RPC是已聚苯乙烯為基架的新一代反相填料，具有極強(qiáng)的化學(xué)穩(wěn)定性，可耐受強(qiáng)酸強(qiáng)堿，兼容pH1－12，可用1MNaOH在位清洗和消毒，使用壽命長，疏水性和C18相近，不僅分辨率高，選擇性寬，載量高，顆粒均勻；而且高流速低反壓，非常容易放大。而一般的反相硅膠具有不耐堿，高反壓，難裝柱，不易放大的特點(diǎn)。
（四）硅膠
硅膠Silica正相層析是植物化學(xué)和中藥化學(xué)的主流技術(shù)，應(yīng)用非常廣泛，是**經(jīng)典的分離純化技術(shù)。
二．Sephadex LH－20純化中草藥有效成分
1．利用Sephadex LH-20純化黃酮類物質(zhì)及黃酮甙
黃酮類化合物是泛指兩個(gè)苯環(huán)通過三個(gè)碳原子相互聯(lián)結(jié)而成的系列化合物，廣泛存在于天然植物中。在植物體內(nèi)大部分與糖成甙，一部分以甙元形式存在，大多數(shù)呈黃色或淡黃色。它的生理作用也多種多樣。利用Sephadex LH-20純化黃酮類物質(zhì)**經(jīng)典的例子是對(duì)橙皮素，山奈酚和槲皮素的分離。
燈盞花具有治療腦血栓形成、腦栓塞、多發(fā)性神經(jīng)炎等腦血管意外所致的癱瘓癥。現(xiàn)在的中藥均是以其總黃酮作為藥效成分，利用Sephadex LH-20結(jié)合其它方法就可以將其四種不同的黃酮類物質(zhì)分開。它們是燈盞乙素（scutellarin）、5，6，4‘-三羥基黃酮-7-0-β- D –半乳糖醛酸苷、燈盞甲素和黃芩素7-0-β- D –吡喃葡萄糖苷2。為進(jìn)一步探索其生理機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。另外，梁鴻和趙玉英3等人利用Sephadex LH-20將柴胡中的八種黃酮類化合物分離。它們是柴胡色原酮酸、蘆丁、槲皮異鼠李素、異鼠李素3-葡萄糖甙、葛根素、7、4’-二羥基-異黃酮-7-葡萄糖甙、色氨酸。
臺(tái)灣科學(xué)家4在Loranthus Kaoi Kiu 葉中分離出八種黃酮類物質(zhì)。它們是1、兒茶素的混合物 2、表兒茶素 3、 2‘，4’，6‘-三羥基二氫黃酮4’-0-β- D-乳糖甙，4、松烯柏素-7-o-β-D- 乳糖甙 5、山奈酚-3-0-α-D- 鼠李糖甙 6、山奈酚3，7-二-0-β- D 乳糖甙 7、槲皮素3-0-α- D- 鼠李糖甙 8 、槲皮素3-0-β- D 乳糖甙。在工藝中，有兩步使用Sephadex LH-20。
下圖！為使用Sephadex LH-20純化40%大豆異黃酮的浸提混合物，一步就可得到純度90%以上的大豆異黃酮。下圖2為使用Sephadex LH-20純化紅色黃花素
3．利用Sephadex LH-20純化生物堿
生物堿是來源于植物界的一大類含氮有機(jī)化合物，大多數(shù)具有較復(fù)雜的氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)，具有廣泛的生理活性，是許多中草藥和藥用植物的有效成分。常見的即包括吡咯類、哌啶類、吲哚類、咪唑類、奎寧類、苯丙二氮卓類等。在植物中的生物堿往往是幾種或幾十種并存，且來源于同一個(gè)前體，因此，使用傳統(tǒng)的方法很難取得高純度的單體。但使用Sephadex LH-20可以獲得滿意的效果。
J. Labrana 和G.Choy15從Narcissus bujei 中利用Sephadex LH-20將石蒜堿和高石蒜堿有效的進(jìn)行了分離。K.Schmidt 和S.Stoyanova從菌絲體中利用Sephadex LH-20有效的分離出了嘧啶堿。另外，可利用Sephadex LH-20分離五種具有鎮(zhèn)定、催眠效用的苯丙二氮卓類生物堿；治療各種疼痛癥的腺嘌呤17；治療肺虛久咳的腺甙浙貝寧、茄啶18及有起死回生效用的日本附子里的烏頭堿19。
4．利用Sephadex LH-20純化有機(jī)酸，多酚和醇
在中藥中常見的有機(jī)酸有檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸、草酸等。它們?cè)谥参矬w內(nèi)除少數(shù)以游離態(tài)存在以外，一般都與鉀、鈣、鎂等金屬離子或生物堿成鹽。使用Sephadex LH-20以丙酮作為流動(dòng)相可以將琥珀酸、馬來酸和酒石酸進(jìn)行分離。在Sephadex LH-20上也可分離克級(jí)量的2-乙酰胺基苯甲酸的兩個(gè)異構(gòu)體20。近年來，利用Sephadex LH-20分離多酚及含多酚的有機(jī)酸報(bào)道較多，如分離茶多酚的主要成分兒茶素，在Larix decidue Mill菌根中提取多酚化合物p-羥基苯甲酸葡萄苷、p-羥苯基葡萄糖、云杉苷、兒茶素和表-兒茶素22，Ryszard Amearowicz等以甲醇為流動(dòng)相從扁豆中提取抗氧化多酚活性物質(zhì)，Marian Naczk等從油菜籽中提取丹寧酸23。圖3為使用Sephadex LH－20 純化迷迭香酸的圖譜。圖4為分離 白藜蘆醇的圖譜。#p#分頁標(biāo)題#e#
