目錄 

1柱層層析硅膠 柱層層析硅膠 

性狀：該產(chǎn)品為白色均勻顆粒，主要成分為二氧化硅，由優(yōu)質(zhì)硅膠為原料加工制成。其主要特點是能通過對混合物質(zhì)中的不同成分吸附保留時間的差異，達到分離提純的目的。依其純度又分為工業(yè)級粗孔柱層析硅膠、試劑級柱層析硅膠。 用途：主要用于石油產(chǎn)品的精制，脫除芳烴物質(zhì)或用于中草藥有效成分的分離提純，高純度物質(zhì)的制備等。 規(guī)格： 

*際慣例：63-212μm（70-230目）；38-63μm（230-400目） 

*內(nèi)常規(guī)：150-250μm （60-100目）；75-150μm  （100-200目）；45-75μm   （200-300目）（也可按用戶需求加工成其他規(guī)格 ） 

    包裝：20 公斤/復(fù)合袋；20公斤/紙箱或20公斤/紙板桶（內(nèi)襯聚乙烯袋）或根據(jù)客戶要求提供。 

貯存：應(yīng)貯存在干燥、通風(fēng)的倉庫里，避免受潮與易揮發(fā)物混貯。 硅膠表面結(jié)構(gòu)概述 

在色譜和工業(yè)水處理*域中，無定形硅膠已得到了廣泛的應(yīng)用，它具有多孔的無定形結(jié)構(gòu)，不產(chǎn)生任何x 射線衍射[1,4]。硅膠的表面存在著硅醇基團(si-oh)和暴露的硅氧烷鍵(si-o-si)。硅醇基團是強吸附的極性基團，而硅氧烷鍵是疏水基團。硅氧烷鍵上的δ鍵被dπ-pπ作用而加強，氧原子上的孤對電子參與π作用，不能參與給體與受體間的相互作用，不能形成氫鍵。scott和kucera證實硅氧烷基團幾乎不吸附極性溶劑分子。然而，由于硅氧烷鍵的疏水作用性，可以吸附某些非極性溶劑分子。對硅膠改性而言，硅醇基比硅氧烷基重要得多。硅醇基團可以孤立、成對(雙生)和締合(連位)等不同的方式存在于硅膠表面。**近研究表明，不僅兩個或兩個以上的締合硅醇基團可以形成鍵合對，甚**成對硅醇基團也可以形成鍵合對。硅膠表面的結(jié)構(gòu)可以通過許多方法進行測定。一般情況下，隨著比表面積的增加，硅膠表面上硅醇基團的濃度略有降低。通常硅醇含量的測定方法有同位素交換法、滴定法、光譜法和烷基鋁法等。nawrock[1]報道了用同位素交換法測定硅膠表面的硅醇基濃度是8.0±1.0μmol/m2，而且這個數(shù)值常常被視為硅膠的物理化學(xué)常數(shù)。硅醇基團具有明顯的酸性，測定的pka值是7.1。通過對硅膠表面的結(jié)構(gòu)分析，可知硅膠表面硅醇基的類型、濃度和表面分布都會影響所制備鍵合相的性能，而硅膠的預(yù)處理則可以改變表面硅醇類型的分布，提高表面的締合硅醇的含量，改善硅膠表面鍵合相的性能。 硅膠的再生方法 

硅膠在使用中因吸附了介質(zhì)中的水分或其他有機物質(zhì)，當(dāng)其吸附效果不能滿足凈化要求時，可采用不同的方法再生后重復(fù)使用。再生方法和條件應(yīng)根據(jù)被硅膠吸附的物質(zhì)以及硅膠的種類加以選擇。     a) 硅膠吸附有機雜質(zhì)后的再生： 

漂洗法：將硅膠在水蒸汽中吸附，達到飽和后放到熱水中浸泡漂洗，并可結(jié)合使用洗滌劑脫除被硅膠  

吸附的有機雜質(zhì)，在經(jīng)凈水洗滌后烘焙脫水。 溶劑沖洗法： 

根據(jù)硅膠吸附的有機物種類，選用適當(dāng)?shù)娜軇瑢⑽皆诠枘z內(nèi)的有機物溶出，然后將硅膠升溫以脫 出溶劑。 

焙燒法：對于粗孔硅膠，可放在焙燒爐內(nèi)，使其逐步升溫**500-600攝氏度，膠粒吸附的有機雜質(zhì) 

在高溫下被氧化呈現(xiàn)白色或黃褐色即可。     b) 硅膠吸附水分后再生 

硅膠吸附水分后可通過除掉其水分而再生。加熱方式有多種，如：電熱爐加熱、間接蒸汽加熱、煙道余熱加熱和熱風(fēng)干燥等。熱脫附的溫度一般控制在150攝氏度（+-50）為宜，對藍膠指示劑應(yīng)控制在 

80-100度為宜。各種美高硅膠再生時的**高溫度不應(yīng)超過以下限度： 粗孔硅膠： 不得高于600攝氏度 細孔硅膠： 不得高于250攝氏度 藍    膠： 不得高于120攝氏度 層析技術(shù)在中藥化學(xué)中的應(yīng)用 

層析技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展，對于植物各類化學(xué)成分的分離鑒定工作起到重大的推動作用。如中藥丹參的化學(xué)成分在30年代僅從中分離到3種脂溶性色素，分別稱為丹參酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。但以后進一步的研究，發(fā)現(xiàn)除丹參酮Ⅰ為純品外，Ⅱ、Ⅲ、均為混合結(jié)晶。此后通過各種層析方法，迄今已發(fā)現(xiàn)15種單體（其中有4種為我***發(fā)現(xiàn)）。目前新的層析技術(shù)不斷發(fā)展，隨著層析理論和電子學(xué)、光學(xué)、計算機等技術(shù)的應(yīng)用，層析技術(shù)已日趨完善。   層析法的基本原理： 

    層析過程是基于樣品組分在互不相溶的兩“相”溶劑之間的分配系數(shù)之差（分配層析），組分對吸附劑吸附能力不同（吸附層析），和寓子交換，分子的大?。ㄅ抛鑼游觯┒蛛x。通常又將一般的以流動相為氣體的稱為氣相層析，流動相為液體的稱為液相層析。 

一、 吸附層析法（AdsorptionChromatography） 

  （一）吸附劑、溶劑與被分離物性質(zhì)的關(guān)系：液一固吸附層析是運用較多的一種方法，特別適用于很多中等分子量的樣品（分子量小于1，000的低揮發(fā)性樣品）的分離，尤其是脂溶性成分一一般不適用于高分子量樣品如蛋白質(zhì)、多糖或離子型親水住化合物等的分離。吸附層析的分離效果，決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物的性質(zhì)這三個因素。 

   1． 吸附劑：常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭、硅酸鎂、聚酰胺、硅藻土等。 #p#分頁標(biāo)題#e#

  （1） 硅膠：層析用硅膠為一多孔性物質(zhì)，分子中具有硅氧烷的交鏈結(jié)構(gòu)，同時在顆 

  粒表面又有很多硅醇基。硅膠吸附作用的強弱與硅醇基的含量多少有關(guān)。硅醇基能夠通過氫鍵的形成而吸附水分，因此硅膠的吸附力隨吸著的水分增加而降低。若吸水量超過17％，吸附力極弱不能用作為吸附劑，但可作為分配層析中的支持劑。對硅膠的活化，當(dāng)硅膠加熱**100～110℃時，硅膠表面因氫鍵所吸附的水分即能被除去。當(dāng)溫度升高**500℃時，硅膠表面的硅醇基也能脫水縮臺轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩跬殒I，從而喪失了因氫鍵吸附水分的活往，就不再有吸附劑的性質(zhì)，雖用水處理亦不能恢復(fù)其吸附活性。所以硅膠的活化不宜在較高溫度進行（一般在170cC以上即有少量結(jié)合水失去）。 

  硅膠是一種酸性吸附劑，適用于中性或酸性成分的層析。同時硅膠又是一種弱酸性陽離子交換劑，其表面上的硅醇基能釋放弱酸性的氫離子，當(dāng)遇到較強的堿注化臺物，則可因離子交換反應(yīng)而吸附堿性化合物。 

  （2）氧化鋁：氧化鋁可能帶有堿性（因其中可混有碳酸鈉等成分），對于分離一些堿性中草藥成分，如生物堿類的分離頗為理想。但是堿性氧化鋁不宜用于醛、酮、醋、內(nèi)酯等類型的化合物分離。因為有時堿性氧化鋁可與上述成分發(fā)生次級反應(yīng)，如異構(gòu)化、氧化、消除反應(yīng)等。除去氧化鋁中絢堿性雜質(zhì)可用水洗**中性，稱為中性氧化鋁。中性氧化鋁仍屬于堿性吸附劑的范疇，本適用于酸性成分的分離。用稀硝酸或稀鹽酸處理氧化鋁，不僅可中和氧化鋁中含有的堿性雜質(zhì)，并可使氧化鋁顆粒表面帶有NO3一或CI一的陰離子，從而具有離于交換劑的性質(zhì)，適合于酸性成分的層析，這種氧化鋁稱為酸性氧化鋁。供層析用的氧化鋁，用于拄層析的，其粒度要求在100～160目之間。粒度大子100目，分離效果差：小于160目，溶濃流速大慢，易使譜帶擴散。樣品與氧化鋁的用量比，一般在1：20～50之間層析柱的內(nèi)徑與柱長比例在1：10-20之向。 

  在用溶劑沖洗柱時，流速不宜過快，洗脫液的流速一般以每半～1小時內(nèi)流出液體的毫升數(shù)與所用吸附劑的重量（克）相等為合適。 

  （3）活性炭：是使用較多的一種非極性吸附劑。一般需要先用稀鹽酸洗滌，其次用乙醇洗，再以水洗凈，于80℃干燥后即可供層析用。層析用的活性炭，**好選用顆?；钭⑻?，若為活性炭細粉，則需加入適量硅藻土作為助濾劑一并裝柱，以免流速太慢。活性炭主要且于分離水溶性成分，如氨基酸、糖類及某些甙?；钚蕴康挠袨槲阶饔?，在水溶液中**強，在有機溶劑中則較低弱。故水的洗脫能力**弱，而有機溶劑則較強。例如以醇-水進行洗脫時，則隨乙醇濃度的遞增而洗脫力增加。活性炭對芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物，對大分子化合物的吸附力大于小分子化合物。利用這些吸附性的差別，可將水溶性芳香族物質(zhì)與脂肪族物質(zhì)分開，單糖與多糖分開，氨基酸與多肽分開。 

  2．溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對組分分離關(guān)系極大。在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮在用極性吸附劑進行層析時，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。 

  在柱層操作時，被分離樣品在加樣時可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫。如果極性增大過訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時可以用溶劑的介電常數(shù)（ε）來表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。對非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強。 

  3．被分離物質(zhì)的性質(zhì)：被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強。 

   當(dāng)然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團的數(shù)目愈多，被吸附的住能就會更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會強些?？傊?，只要兩個成分在結(jié)構(gòu)上存在差別，就有可能分離，關(guān)鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)，吸附劑的吸附強度，與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來考慮。shou先要考慮被分離物質(zhì)的極性。如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧但非極性基團，則需選用吸附性較強的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進行洗脫。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般Ⅲ～Ⅳ級）。采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度遞增，或可應(yīng)用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系?，F(xiàn)以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。當(dāng)以硅膠為吸附劑時，使油脂被吸附后選用一系列混合溶劑進行洗脫，油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫。    又如對于C-27甾體皂甙元類成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分離：將混合皂甙元溶于含有5％氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應(yīng)降低，亦即采用苯或含5％氯仿的苯，即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來。這一例子說明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時，需用不同的溶劑才能達到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關(guān)系。 #p#分頁標(biāo)題#e#

  （二）簿層層析：薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進行層析時一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。 

  1．薄層層析的特點：薄層層析在應(yīng)用與操作方面的特點與柱層析的比較。   2．吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細，一般應(yīng)小于250目，并要求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預(yù)制薄層一般活度不宜過高，以Ⅱ～Ⅲ級為宜。而展開距離則隨薄層的粒度粗細而定，薄層粒度越細，展開距離相應(yīng)縮短，一般不超過10厘米，否則可引起色譜擴散影響分離效果。 

  3．展開劑的選擇：薄層層析，當(dāng)吸附劑活度為一定值時（如Ⅱ或Ⅲ級），對多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定于展開劑的選擇。中草藥化學(xué)成分在脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。但在實際工作中，經(jīng)常需要利用溶劑的極性大小，對展開劑的極性予以調(diào)整。   4. 特殊薄層：針對某些性質(zhì)特殊的化合物的分離與檢出，有時需采用一些特殊薄層。 

  ① 熒光薄層：有些化合物本身無色，在紫外燈下也不顯熒光，又無適當(dāng)?shù)娘@色劑時，則可在吸附劑中加入熒光物質(zhì)制成熒光薄層進行層析。展層后置于紫外光下照射，薄層板本身顯熒光，而樣品斑點處不顯熒光，即可檢出樣品的層析位置。常用的熒光物質(zhì)多為無機物。其一是在 254nm紫外光激發(fā)下顯出熒光的，如錳激潔的硅酸鋅。另一種為在365nm紫外光激發(fā)下發(fā)出熒光的，如銀激化的硫化鋅硫化鎬。 

  ② 絡(luò)合薄層：常用的有硝酸銀薄層，用來分離碳原子數(shù)相等而其中C一C雙鍵數(shù)目不等的一系列化合物，如不飽和醇、酸等。其主要機理是由于C一C鍵能與硝酸銀形成絡(luò)合物，而飽和的C一C鍵則不與硝酸銀絡(luò)合。因此在硝酸銀薄層上，化臺物可由于飽和程度不同而獲得分離。層析時飽和化合物由于吸附**弱而Rf**高，含一個雙鍵的較含兩個雙鍵的Rf值高，含一個三鍵的較含一個雙鍵的Rf值高。此外，在一個雙鍵化臺物中，順式的與硝酸銀絡(luò)合較反式的易于進行。因此，還可用來分離順反異構(gòu)體。 

  ③ 酸堿薄層和PH緩沖薄層：為了改變吸附劑原來的酸堿性，可在鋪制薄層時采用稀酸或稀堿以代替水調(diào)制薄層。例如硅膠帶微酸性，有時對堿性物質(zhì)如生物堿的分離不好，如不能展層或拖尾，則可在鋪薄層時，用稀堿溶液0.1～0．5NNa0H溶液制成堿性硅膠薄層。例如豬屎豆堿在以硅膠為吸附劑時，以氯仿-丙酮一甲醇（8：2：1）為展開劑Rf＜0．1，采用堿性硅膠薄層用上述相同展開劑，Rf值增**0．4左右。說明豬屎豆堿為--堿性生物堿。 

  5.應(yīng)用：薄層層析法在中草藥化學(xué)成分的研究中，主要應(yīng)用于化學(xué)成分的預(yù)試、化學(xué)成分的鑒定及探索柱層分離的條件。 

  用薄層層析法進行中草藥化學(xué)成分預(yù)試，可依據(jù)各類成分性質(zhì)及熟知的條件，有針對性地進行。由于在薄層上展層后，可將一些雜質(zhì)分離，選擇性高，可使預(yù)試結(jié)果更為可靠。 

  以薄層層析法進中草藥化學(xué)成分鑒定，**好要有標(biāo)準(zhǔn)樣品進行共薄層層析。如用數(shù)種溶劑展層后，標(biāo)準(zhǔn)品和鑒定品的Rf值、斑點形狀顏色都完全相同，則可作初步結(jié)論是同一化合物。但一般需進行化學(xué)反應(yīng)或紅外光譜等一種儀器分析方法加以核對。 

  用薄層層析法探索柱層分離條件，是實驗室的常規(guī)方法。在進行柱層分離時，shou先考慮選用何種吸附劑與洗脫劑。在洗脫過程中各個成分將按何種順序被洗脫，每一洗脫液中是否為單一成分或混合體，均可由薄層的分離得到判斷與檢驗。通過薄層的預(yù)分離，還可以了解多組分樣品的組成與相對含量。如在薄層上摸索到比較滿意的分離條件，即可將此條件用于干柱層析。但亦可以將薄層分離條件經(jīng)適當(dāng)改變，轉(zhuǎn)**一般往層所采用洗脫的方式進行制備柱分離。利用薄層的預(yù)分離尋找柱層的洗脫條件時,假定在薄層上所測得的Rf值一樣品在柱層中的比移率（R）。這是由于在薄層展開時，薄層固定相中所含的溶劑經(jīng)過不斷的蒸發(fā)，而使薄層上各點位置所含的溶劑量是不等的，靠近起始線的含量高于薄層的前沿部分。但若嚴(yán)格控制層析操作條件，則可得到接近真實的Rf值。用薄層進行某一組分的分離，其Rf值范圍，一般情形下為0．85＞Rf＞0．05。此外，薄層層析法亦應(yīng)用于中草藥品種、藥材及其制劑真?zhèn)蔚臋z查、質(zhì)量控制和資源調(diào)查，對控制化學(xué)反應(yīng)的進程，反應(yīng)副產(chǎn)品產(chǎn)物的檢查，中間體分析，化學(xué)藥品及制劑雜質(zhì)的檢查，臨床和生化檢驗以及毒物分析等，都是有效的手段。 硅膠柱層析技術(shù) 硅膠柱層析原理 

       硅膠層析法的分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附力不同而得到分離， 一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附，極性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附，整個層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。   

硅膠柱層析流動相 

      極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)；極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)；極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸  #p#分頁標(biāo)題#e#

硅膠柱層析慣用方法 

1.稱量。200-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。 

2.攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢?。如果洗脫劑是石油?乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預(yù)先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。 

3.裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。 

4.壓實。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直**流速恒定。柱床約被壓縮**9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應(yīng)進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂。5.上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞**接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。 

6.過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權(quán)衡。太低的洗脫強度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收一餾分。 

7.檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個數(shù)量級。 

8.送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的**后純化手段。可除去氫譜1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。 注意事項 

1.先根據(jù)TLC方法篩選好洗脫劑，使兩相鄰物質(zhì)Rf值之差**大化 2.將柱子必須裝平整、均勻 3.考慮有限柱填料的吸附量 4.可考慮用剃度法分開并洗脫